A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura.
O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.
PRINCÍPIO DA COLORAÇÃO DE GRAM
Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.
A coloração envolve 3 etapas principais:
- Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo);
- A descoloração (utilizando etanol / acetona);
- A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).
DIFERENÇA ENTRE BACTÉRIA GRAM-POSITIVA E GRAM-NEGATIVA
A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos.
As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.
Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.
Exemplos de bactérias Gram-positivas
Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.
Exemplos de bactérias Gram-negativas
Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella.
PASSO A PASSO DA METODOLOGIA DE GRAM
- Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos;
- Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos;
- Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
- Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
- Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
- Lave em um filete de água corrente;
- Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
- Lave em um filete de água corrente;
- Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo;
- Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).
APLICAÇÃO E BENEFÍCIOS DA COLORAÇÃO DE GRAM
De fato a metodologia irá ajudar na identificação de uma infecção bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em cada caso.
Mesmo que nem todas as bactérias possam ser diferenciadas através da coloração de Gram, com certeza a metodologia tem grande aplicação no diagnóstico clínico e pesquisa biológica.
Fonte:
Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
